La nouvelle communauté religieuse carmélite prend possession des lieux encore en travaux, le 2 juillet 1625, jour de la fête de la Visitation, au cours d’une procession mémorable où toute la ville se presse.
Cette première communauté est composée d’une prieure (Mère Élisabeth) et d’une sous-prieure (Sœur Catherine) venues de Paris, de 5 sœurs professes venues du Carmel de Rouen, d’une sœur converse venue de Paris (Jeanne de saint-Denis, première religieuse à mourir au carmel, enterrée dans le cloître) et d’une postulante venue de normandie.
Le noviciat fonctionne dès la première année d’ouverture du monastère. La première postulante venue de Paris à prendre l’habit n’a que 16 ans. Elle fait profession en présence de Pierre de Bérulle. Deux jours après, la première sénonaise se présente. En 1632 la communauté compte déjà 18 religieuses professes, dont 10 venues du diocèse de Sens et 2 novices. En 1650 les sœurs sont 24, dont 20 sénonaises.
23 prieures vont présider à la vie de la maison jusqu’aux sombres jours de 1790.